菲羅門色譜柱的維護對于延長其使用壽命、保持分離效果和確保實驗準確性至關(guān)重要。以下是系統(tǒng)化的維護策略及具體操作步驟:
  1.過濾凈化不可少
  所有溶劑必須經(jīng)過0.22μm濾膜過濾,建議使用帶預(yù)過濾器的保護裝置進行在線過濾;
  水相流動相應(yīng)脫氣處理(超聲震蕩或在線脫氣機),避免溶解氧導致填料氧化降解。
  2.pH值嚴格控制
  常規(guī)C18/C8柱建議保持pH范圍2-8;若使用極*pH條件,須選用專用耐酸堿填料;
  緩沖鹽濃度不超過50mM以防止鹽析出結(jié)晶堵塞管路。
  3.避免顆粒物沖擊
  樣品溶液需先經(jīng)針筒過濾器過濾后再進樣;
  禁止直接注射渾濁溶液或含懸浮物的復雜基質(zhì)。
  二、菲羅門色譜柱周期性保養(yǎng)流程
  1.基礎(chǔ)沖洗程序(每月一次)
  反向沖洗再生法
  切換為高比例強溶劑,以正常流速反向沖洗60分鐘;
  此操作可有效去除累積的弱保留雜質(zhì),恢復柱效達初始值的95%以上。
  過渡梯度平衡
  完成分析后繼續(xù)運行5%~10%梯度增量直至基線平穩(wěn),防止不同批次間交叉污染。
  保存溶劑置換
  長期閑置時改用同比例混合的甲醇/乙腈溶液保存,每周更換新鮮溶劑防止微生物滋生。
  2.深度清潔方案(每季度實施)
  針對嚴重污染情況可采用分段式清洗策略:
  脂溶性污染物清除
  依次用正己烷→異丙醇→二氯甲烷各沖洗30分鐘,中間穿插空白運行檢測殘留;
  注意:避免使用氯仿等強鹵代烴類溶劑以免損傷封端鍵合相。
  離子型殘留分解
  配制含0.1%三氟乙*的乙腈溶液,低流速循環(huán)清洗2小時;
  后續(xù)用pH7緩沖液中和至中性后再過渡回常規(guī)流動相。
  生物活性物質(zhì)滅活
  對蛋白質(zhì)結(jié)合導致的失活現(xiàn)象,可用含0.05%疊氮鈉的磷酸鹽緩沖液浸泡過夜。
 
